故事从一艘黑夜中的赌船开始……男主角,伊藤开司,浑浑噩噩,一事无成,因为好心替人做了担保而背负上了数百万债务。为偿还欠款,开司接受怂恿上了一艘名为“希望之船”的渡轮,为的是参加一次神秘赌局,一旦获胜,就能将欠款一笔勾销。上到贼船后开司才发现,参与者多是如自己一般的失败青年。然后主办方便开出了赌局的规则:参与者须以标着“石头,剪刀,布”的扑克为道具,夺取对手身上的星星标志,赌局结束时,扑克牌未用完或星星少于三颗者将失去资格,而参赛初所能向主办方借贷的巨款,也成为让他们盈利或逃生的重要因素……
正就读中学的少年迈尔斯(沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音)意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤,随后身体发生奇特的变化。偶然机缘,他目睹了蜘蛛侠(克里斯·派恩 Chris Pine 配音)和犯罪头目金并(列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音)的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙,蜘蛛侠最终壮烈牺牲。可未过多久,来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克(杰克·约翰逊 Jake M. Johnson 配音)出现在迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋,并帮助这个帕克返回自己的宇宙,他们闯入金并的老巢。在这一过程中,二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击。与此同时,来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。 他们合力与恶势力展开斗争……